Анализ препарата «экдистерон»

Здравствуйте.
Рады приветствовать вас на сайте Союза «Федерация судебных экспертов».
Экдистерон — это фитоэкдизоид, природное анаболическое соединение, содержащееся в растении левзея сафлоровидная (Rhaponticum carthamoides). Производитель заявляет 400 мг экстракта левзеи, но не указывает массовую долю экдистерона. Обычно в стандартизированных экстрактах указывают содержание экдистерона (например, «не менее 5%» или «10 мг»). Если этого нет, препарат может быть низкокачественным (содержание экдистерона близко к нулю). Для определения фактической концентрации действующего вещества и решения вопроса о соответствии требованиям ТР ТС (для БАД) или фальсификации проводится анализ препарата «экдистерон».
Что определяется
Эксперт-химик (хроматографист) выполнит:

• Количественное определение экдистерона (20-гидроксиэкдизон) в капсуле или таблетке методом ВЭЖХ-УФ (высокоэффективная жидкостная хроматография с ультрафиолетовым детектором). Длина волны 242 нм.
• Подтверждение идентичности экдистерона (сравнение времени удерживания со стандартом).
• Определение массовой доли экдистерона в пересчёте на капсулу (мг/капсулу) и на экстракт (%).
• При необходимости — анализ сопутствующих компонентов (наполнители, связующие, другие экдистероиды, примеси).

Стоимость в Москве
Цена на анализ препарата «экдистерон» зависит от количества образцов (одна капсула / партия) и необходимости полной валидации метода. В среднем по нашему учреждению:

• Качественное обнаружение экдистерона (ВЭЖХ-УФ, 1 образец) — 5 000 – 7 000 рублей.
• Количественное определение экдистерона (калибровка по стандарту, 1 образец) — 7 000 – 10 000 рублей.
• Подготовка проб (экстракция из капсулы, очистка) — 2 000 – 3 000 рублей.
• Анализ на другие экдистероиды (интегристерон и пр.) — дополнительно 5 000 – 8 000 рублей.
• Полный комплекс для суда (образец + стандарт + валидация + заключение) — 18 000 – 25 000 рублей.
• Срочный режим (результат за 2–3 дня) — доплата 40%.

Сроки проведения
Длительность анализа препарата «экдистерон»:

• Приёмка, вскрытие капсулы, взвешивание содержимого — 1 день.
• Экстракция экдистерона из порошка (метанолом, ультразвуковая ванна, центрифугирование) — 1 день.
• Фильтрация, разведение, инжекция в ВЭЖХ — 1 день.
• Калибровка по стандарту экдистерона (минимум 5 точек) — 1 день.
• Анализ и интеграция пиков — 1 день.
• Оформление протокола — 1 день.
  Итого: от 5 до 7 рабочих дней (1–1,5 недели).

Какие документы необходима
Для проведения анализа препарата «экдистерон» предоставьте:

1. Образец препарата — блистер или банка с капсулами, желательно не менее 10 капсул (чтобы провести анализ из разных капсул).
2. Упаковка с обозначением состава: «экстракт левзеи сафлоровидной 400 мг».
3. Сертификат соответствия (если есть) — чтобы знать, какие заявлены нормы.
4. Данные о производителе и партии.
5. При судебной экспертизе — определение суда с вопросами: «Какова фактическая доза экдистерона в одной капсуле?», «Соответствует ли содержание экдистерона заявленному (например, 5%)?».

Как провести (процедура)
Процесс анализа препарата «экдистерон»:

• Шаг 1. Внешний осмотр: капсулы целые, одинаковые, без трещин, порошок однородный.
• Шаг 2. Извлечение содержимого 5 капсул, объединение, тщательное перемешивание. Взвешивание средней массы содержимого одной капсулы.
• Шаг 3. Навеска порошка (около 50 мг) переносится в мерную колбу 25 мл, добавляется 20 мл метанола (или этанол : вода 70:30), экстрагируется в ультразвуковой бане 30 минут, затем доводят до метки метанолом, центрифугируют, фильтруют 0,45 мкм.
• Шаг 4. Приготовление стандартного раствора экдистерона (аналитический стандарт, например, Sigma-Aldrich) в метаноле в концентрации 0,1 мг/мл.
• Шаг 5. ВЭЖХ-УФ анализ: колонка C18 (150×4,6 мм, 5 мкм), элюент ацетонитрил : вода (20:80 или градиент), скорость 1 мл/мин, детектор УФ 242 нм. Вводят 20 мкл образца и стандарта.
• Шаг 6. Интегрируют пик экдистерона (время удерживания около 5–7 минут в зависимости от условий). Рассчитывают концентрацию в растворе образца по калибровочному графику, затем пересчитывают на мг на капсулу.
• Шаг 7. Эксперт делает вывод: «В одной капсуле содержится X мг экдистерона (например, 3 мг). При заявленных 400 мг экстракта это соответствует содержанию действующего вещества 0,75%». Если производитель не указывал % экдистерона, он может и не нарушать закон, но ваш заказчик узнает реальную дозировку.

Какие трудности могут возникнуть

1. Нет стандарта экдистерона для калибровки. Методика не может быть валидирована, результат будет полуколичественным (например, «около 2–4 мг»). Для судебного дела лучше купить стандарт (около 15 000 руб.) или заказать анализ в организации, где он есть. У нас стандарт имеется.
2. Экстракт левзеи содержит не только экдистерон, но и другие экдистероиды (интегристерон, полиподин B). Они также дают пики на ВЭЖХ, могут искажать интеграцию. Эксперт должен разделить их, используя более длинный градиент и детекцию на масс-спектрометре (ВЭЖХ-МС). Это дополнительно 10 – 15 тыс. руб.
3. Низкое содержание экдистерона (менее 0,5 мг/капсула) на пределе обнаружения. Если производитель сильно разбавил экстракт (например, 400 мг экстракта, а экдистерона 0,2 мг), то экстракция в ВЭЖХ может дать пик на уровне шума. Эксперт напишет «менее предела обнаружения», но это не значит «0». Клиент может обвинить вас в некачественном анализе.
4. Капсулы имеют оболочку из желатина, которая может содержать красители, мешающие УФ. Перед экстракцией следует отделить содержимое капсулы, не растворяя желатин. Или учитывать его при расчёте. Эксперт действует осторожно.
5. Нет заявленного норматива (например, 5% экдистерона в экстракте). Если производитель в составе просто написал «экстракт левзеи» без гарантии минимального содержания экдистерона, то даже если в нём 0,1% экдистерона, это может считаться допустимым. Судья встанет на сторону производителя. Эксперт ответит на вопрос «сколько», а «соответствует ли» — только если есть ТУ или ГОСТ.
6. Разные партии могут отличаться. Для гарантии нужно проанализировать 3–5 капсул из разных упаковок. Заказчик приносит одну капсулу — результат только для неё.

Где провести в Москве
Помимо нашей организации, анализ экдистерона проводят в лабораториях биологического факультета МГУ (кафедра биохимии), в ФГУП «Государственный институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов» и в некоторых частных центрах (например, «Аналит-эксперт»). Союз «Федерация судебных экспертов» имеет ВЭЖХ-УФ и стандарт экдистерона для количественного анализа.
Общие правила и процедура проведения
Анализ препарата «экдистерон» проводится по:

• Внутренним методикам на основе фармакопейных статей (например, Европейская фармакопея 2.8.25 — высокоэффективная жидкостная хроматография).
• ГОСТ Р 52852-2007 (БАД к пище. Методы определения биологически активных веществ) — адаптирован для экдистероидов.
  Процедура:
• Образец готовят из не менее чем 5 капсул (для усреднения).
• Определение проводят при длине волны 242 нм, используя подвижную фазу с оптимизированным рН.
• Количественный расчёт: концентрация образца (мг/капсулу) = (площадь пика образца / площадь пика стандарта) × концентрация стандарта × коэффициент разведения.
• Предел обнаружения — 0,1 мг/капсулу, предел количественного определения — 0,5 мг/капсулу.
• Заключение содержит среднее значение (мг/капсулу), стандартное отклонение, сравнение с ожидаемым содержанием, если оно известно.

И запомните: анализ препарата «экдистерон» — это единственный способ узнать, сколько вы действительно платите за действующее вещество. Часто оказывается, что в капсуле с экстрактом левзеи содержится всего 1–2 мг экдистерона вместо ожидаемых 20 мг. Наше заключение — основание для претензии к производителю.
За подробной и точной консультацией приглашаем вас в наш офис Союза «Федерация судебных экспертов», адрес которого указан на https://lingex.ru/contacts